| Ämnesområde: |
| Djurhållning och veterinärmedicin |
|
|
| Namn: |
| Ingelman-Sundberg, Magnus |
|
|
|
| E-post: |
magnus.ingelman-sundberg@ki.se |
| Univ./Institution: |
Karolinska Institutet - Fysiologi och farmakologi |
| Projekttitel (sv): |
Nya in vitro-system för bättre prediktion av läkemedelstoxicitet i lever |
| Projekttitel (eng): |
New in vitro systems for better prediction of xenobiotic induced hepatotoxicity |
| Värdhögskola: |
Karolinska Institutet |
| SCB-klassificering: |
|
| Beviljat (SEK): |
Bidragsform |
|
2008 |
|
|
|
|
|
| |
DJURFÖRSÖK |
|
1000000 |
|
|
|
|
|
|
| Beskrivning: |
Djurförsök är till stor del av begränsat värde vad gäller att förutsäga toxicitet på människa. Detta beror till stor del på speciesskillnader i metabolism av kemikalier men också på olika typer av interaktioner mellan kemikalier och intracellulära molekyler som är av stor betydelse för uppkomst av toxicitet. Toxicitetsstudier i stor skala är dessutom ogörliga med användande av försöksdjur, dels beroende på det tveksamma etiska aspekten men också beroende på ekonomiska hänsyn. Goda in vitro-baserade humana system som relativt enkelt och tydligt kan ge svar på toxicitetsegenskaper hos kemikalier är givetvis en mycket fullgott alternativ. Problemen är att i cellkulturer åstadkomma samma fenotyp hos cellerna som finns in vivo samt att kunna erhålla relevanta typer av cellinteraktioner som ligger till grund för toxicitetsutvecklandet. Projektet syftar till att etablera nya typer av in vitro-system som mycket bättre än nuvarande kan förutsäga kemikaliers toxicitet i mänsklig lever. Detta kan kanske leda till utvecklingen av system som avsevärt kan begränsa och kanske helt ersätta djurförsök i många typer av toxicitetsstudier. Vi vill således utveckla alternativa in vitro system baserat på stamcellsderiverade hepatocytlika celler i kombination med makrofager, neutrofiler eller stellatceller som bättre kan förutsäga olika ämnens levertoxicitet. I co-kulturerna har vi även system med hepatomacellinjer, vissa som transfekterats med plasmider för enzym som bioaktiverar kemikalier. Dessa nya system för co-kulturer etableras vidare och valideras m h a kända hepatotoxiner. Våra resultat hittills är mycket lovande och visar på starkt ökad känslighet för troglitazon-inducerad cytotoxicitet i co-kulturer jämfört med singelkulturer. Två delar bearbetas parallellt. I samarbete med Cellartis AB karakteriseras stamcells-deriverade cellinjer med avseende på innehåll av leverspecifika enzymer såsom olika fas I och fas II P450 oxygenaser och transferaser. Denna karakterisering sker med användande western blotting och av global genexpressionsanalys som vi tidigare tillämpat för att karakterisera olika hepatomacellinjer. Dessutom analyseras specifik, för kemikalieaktivering relevant enzymuttryck, på protein- och enzymaktivitetsnivå. Dels etableras parallellt co-kulturer med hjälp av olika humana hepatomacellinjer tillsammans med humana makrofager som bättre kan känna av toxicitet av kemikalier som dels är toxiska i sig själva men också aktiveras metabolt till toxiska slutprodukter. De stamcellsderiverade hepatocytlika cellerna skall successivt evalueras dels ensamma i kultur och även i co-kultur med makrofager, neutrofiler och Stellatceller. Sammanfattningsvis kan projektet leda till möjligheten att utveckla helt nya in vitro-system som kan vara av stor betydelse i framtida program för riskbedömningar av olika kemikaliers toxicitet. Detta kan signifikant bidra till att minska och så småningom kanske helt ersätta djurförsök i många aspekter av den toxikologiska testningen. |
 |